কোষ সংস্কৃতি দূষণ কার্যকরভাবে হ্রাস করা হয়েছিল

কোষ সংস্কৃতির দূষণ সহজেই কোষ সংস্কৃতি পরীক্ষাগারে সবচেয়ে সাধারণ সমস্যা হয়ে উঠতে পারে, কখনও কখনও খুব গুরুতর পরিণতি ঘটায়।কোষ সংস্কৃতির দূষককে দুটি ভাগে ভাগ করা যায়, রাসায়নিক দূষক যেমন মাঝারি, সিরাম এবং জলের অমেধ্য, এন্ডোটক্সিন, প্লাস্টিকাইজার এবং ডিটারজেন্ট এবং জৈবিক দূষক যেমন ব্যাকটেরিয়া, ছাঁচ, ইস্ট, ভাইরাস, মাইকোপ্লাজমা ক্রস সংক্রমণ।অন্যান্য কোষ লাইন দ্বারা দূষিত.যদিও দূষণ সম্পূর্ণরূপে নির্মূল করা অসম্ভব, তবে এর উৎসকে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে বুঝতে এবং ভাল অ্যাসেপটিক কৌশল অনুসরণ করে এর ফ্রিকোয়েন্সি এবং তীব্রতা হ্রাস করা যেতে পারে।

1. এই বিভাগটি প্রধান ধরনের জৈবিক দূষণের রূপরেখা দেয়:
ব্যাকটেরিয়া দূষণ
ছাঁচ এবং ভাইরাস দূষণ
মাইকোপ্লাজমা দূষণ
খামির দূষণ

1.1 ব্যাকটেরিয়া দূষণ
ব্যাকটেরিয়া হল সর্বব্যাপী এককোষী অণুজীবের একটি বড় দল।এগুলি সাধারণত মাত্র কয়েক মাইক্রন ব্যাসের হয় এবং গোলক থেকে রড এবং সর্পিল পর্যন্ত বিভিন্ন আকারে আসতে পারে।তাদের সর্বব্যাপীতা, আকার, এবং দ্রুত বৃদ্ধির হারের কারণে, ব্যাকটেরিয়া, খামির এবং ছাঁচ সহ, কোষ সংস্কৃতিতে সবচেয়ে সাধারণ জৈবিক দূষক।

1.1.1 ব্যাকটেরিয়া দূষণ সনাক্তকরণ
সংক্রামিত হওয়ার কয়েক দিনের মধ্যে সংস্কৃতির চাক্ষুষ পরিদর্শনের মাধ্যমে ব্যাকটেরিয়া দূষণ সহজেই সনাক্ত করা যায়;
সংক্রামিত সংস্কৃতিগুলি সাধারণত মেঘলা (অর্থাৎ, টার্বিড) দেখায়, কখনও কখনও পৃষ্ঠের উপর একটি পাতলা ফিল্ম থাকে।
সংস্কৃতি মাধ্যমের pH-এ আকস্মিক ড্রপগুলিও প্রায়শই সম্মুখীন হয়।
একটি স্বল্প-শক্তি মাইক্রোস্কোপের অধীনে, ব্যাকটেরিয়াগুলি কোষের মধ্যে ক্ষুদ্র, চলমান দানা হিসাবে প্রদর্শিত হয় এবং একটি উচ্চ-শক্তি মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ পৃথক ব্যাকটেরিয়ার আকারগুলি সমাধান করতে পারে।

1.2 ছাঁচ এবং ভাইরাস দূষণ
1.2.1 ছাঁচ দূষণ
ছাঁচ হল ছত্রাকের রাজ্যের ইউক্যারিওটিক অণুজীব যা হাইফাই নামক বহুকোষী ফিলামেন্টের আকারে বৃদ্ধি পায়।এই বহুকোষী ফিলামেন্টের সংযোগকারী নেটওয়ার্কে উপনিবেশ বা মাইসেলিয়াম নামক জিনগতভাবে অভিন্ন নিউক্লিয়াস থাকে।

খামির দূষণের মতো, সংস্কৃতির pH দূষণের প্রাথমিক পর্যায়ে স্থিতিশীল থাকে এবং তারপরে দ্রুত বৃদ্ধি পায় কারণ সংস্কৃতি আরও গুরুতরভাবে সংক্রামিত হয় এবং মেঘলা হয়ে যায়।অণুবীক্ষণ যন্ত্রের নীচে, মাইসেলিয়াম সাধারণত ফিলামেন্টাস, কখনও কখনও স্পোরের ঘন ক্লাস্টার হিসাবে।অনেক ছাঁচের স্পোরগুলি তাদের সুপ্ত অবস্থায় অত্যন্ত কঠোর এবং আতিথ্যহীন পরিবেশে বেঁচে থাকতে পারে এবং সঠিক বৃদ্ধির পরিস্থিতির সম্মুখীন হলেই সক্রিয় হয়।

1.2.2 ভাইরাস দূষণ
ভাইরাসগুলি হল মাইক্রোস্কোপিক সংক্রামক এজেন্ট যা প্রজননের জন্য হোস্ট কোষের যন্ত্রপাতি দখল করে।তাদের অত্যন্ত ছোট আকার তাদের সংস্কৃতিতে সনাক্ত করা এবং কোষ সংস্কৃতি পরীক্ষাগারে ব্যবহৃত বিকারকগুলি থেকে অপসারণ করা কঠিন করে তোলে।যেহেতু বেশিরভাগ ভাইরাসের তাদের হোস্টের জন্য খুব কঠোর প্রয়োজনীয়তা রয়েছে, তাই তারা সাধারণত হোস্ট ছাড়া অন্য প্রজাতির কোষ সংস্কৃতিকে বিরূপভাবে প্রভাবিত করে না।
যাইহোক, ভাইরাস-সংক্রমিত কোষ সংস্কৃতির ব্যবহার পরীক্ষাগার কর্মীদের স্বাস্থ্যের জন্য গুরুতর ঝুঁকি তৈরি করতে পারে, বিশেষ করে যদি পরীক্ষাগারে মানব বা প্রাইমেট কোষ জন্মায়।

কোষের সংস্কৃতিতে ভাইরাল সংক্রমণ ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি দ্বারা সনাক্ত করা যেতে পারে, অ্যান্টিবডিগুলির একটি সেট দিয়ে ইমিউনোস্টেইনিং, ELISA বা উপযুক্ত ভাইরাল প্রাইমার সহ PCR।

1.3 মাইকোপ্লাজমা দূষণ
মাইকোপ্লাজমা হল কোষের প্রাচীরবিহীন সাধারণ ব্যাকটেরিয়া, এবং তারা ক্ষুদ্রতম স্ব-প্রতিলিপিকারী জীব বলে মনে করা হয়।তাদের অত্যন্ত ছোট আকারের কারণে (সাধারণত 1 মাইক্রনের কম), মাইকোপ্লাজমা সনাক্ত করা কঠিন যতক্ষণ না তারা অত্যন্ত উচ্চ ঘনত্বে পৌঁছায় এবং কোষের সংস্কৃতির অবনতি ঘটায়;ততক্ষণ পর্যন্ত, সাধারণত সংক্রমণের কোনও সুস্পষ্ট লক্ষণ নেই।

1.3.1 মাইকোপ্লাজমা দূষণ সনাক্তকরণ
কিছু ধীর-বর্ধমান মাইকোপ্লাজমা কোষের মৃত্যু না ঘটিয়ে সংস্কৃতিতে টিকে থাকতে পারে, তবে তারা সংস্কৃতিতে হোস্ট কোষের আচরণ এবং বিপাককে পরিবর্তন করে।

দীর্ঘস্থায়ী মাইকোপ্লাজমা সংক্রমণ কোষের বিস্তারের হার হ্রাস, স্যাচুরেশন ঘনত্ব হ্রাস এবং সাসপেনশন সংস্কৃতিতে সংযোজন দ্বারা চিহ্নিত করা যেতে পারে।
যাইহোক, মাইকোপ্লাজমা দূষণ সনাক্ত করার একমাত্র নির্ভরযোগ্য উপায় হল নিয়মিতভাবে ফ্লুরোসেন্ট স্টেনিং (যেমন, Hoechst 33258), ELISA, PCR, ইমিউনোস্টেইনিং, অটোরাডিওগ্রাফি, বা মাইক্রোবায়াল টেস্টিং ব্যবহার করে কালচার পরীক্ষা করা।

1.4 খামির দূষণ
খামির হল ছত্রাকের রাজ্যের এককোষী ইউক্যারিওট, আকারে কয়েক মাইক্রন (সাধারণত) থেকে 40 মাইক্রন (কদাচিৎ)।

1.4.1 খামির দূষণ সনাক্তকরণ
ব্যাকটেরিয়া দূষণের মতো, খামির দ্বারা দূষিত সংস্কৃতিগুলি মেঘলা হয়ে উঠতে পারে, বিশেষ করে যদি দূষণ একটি উন্নত পর্যায়ে থাকে।খামির দ্বারা দূষিত সংস্কৃতির pH খুব কম পরিবর্তিত হয় যতক্ষণ না দূষণ আরও গুরুতর হয়, যে পর্যায়ে সাধারণত pH বৃদ্ধি পায়।মাইক্রোস্কোপের নীচে, খামির পৃথক ডিম্বাকৃতি বা গোলাকার কণা হিসাবে প্রদর্শিত হয় এবং ছোট কণা তৈরি করতে পারে।

2. ক্রস সংক্রমণ
যদিও অণুজীব দূষণের মতো সাধারণ নয়, HeLa এবং অন্যান্য দ্রুত বর্ধনশীল সেল লাইনের সাথে অনেকগুলি কোষ লাইনের ব্যাপক ক্রস-দূষণ গুরুতর পরিণতি সহ একটি স্পষ্টভাবে সংজ্ঞায়িত সমস্যা।সম্মানিত সেল ব্যাঙ্ক থেকে সেল লাইনগুলি পান, নিয়মিত সেল লাইনগুলির বৈশিষ্ট্যগুলি পরীক্ষা করুন এবং ভাল অ্যাসেপটিক কৌশলগুলি ব্যবহার করুন৷এই অনুশীলনগুলি আপনাকে ক্রস-দূষণ এড়াতে সহায়তা করবে।ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং, ক্যারিওটাইপিং এবং আইসোটাইপিং আপনার কোষ সংস্কৃতিতে ক্রস-দূষণ আছে কিনা তা নিশ্চিত করতে পারে।

যদিও অণুজীব দূষণের মতো সাধারণ নয়, HeLa এবং অন্যান্য দ্রুত বর্ধনশীল সেল লাইনের সাথে অনেকগুলি কোষ লাইনের ব্যাপক ক্রস-দূষণ গুরুতর পরিণতি সহ একটি স্পষ্টভাবে সংজ্ঞায়িত সমস্যা।সম্মানিত সেল ব্যাঙ্ক থেকে সেল লাইনগুলি পান, নিয়মিত সেল লাইনগুলির বৈশিষ্ট্যগুলি পরীক্ষা করুন এবং ভাল অ্যাসেপটিক কৌশলগুলি ব্যবহার করুন৷এই অনুশীলনগুলি আপনাকে ক্রস-দূষণ এড়াতে সহায়তা করবে।ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং, ক্যারিওটাইপিং এবং আইসোটাইপিং আপনার কোষ সংস্কৃতিতে ক্রস-দূষণ আছে কিনা তা নিশ্চিত করতে পারে।