কোষ সংস্কৃতি পরিবেশ কোষ উৎপাদনকে প্রভাবিত করে

কোষ সংস্কৃতির অন্যতম প্রধান সুবিধা হল কোষের প্রজনন (যেমন তাপমাত্রা, pH, অসমোটিক চাপ, O2 এবং CO2 টেনশন) এবং শারীরবৃত্তীয় পরিবেশ (অর্থাৎ হরমোন এবং পুষ্টির ঘনত্ব) এর ভৌত রসায়ন ম্যানিপুলেট করার ক্ষমতা।তাপমাত্রা ছাড়াও, সংস্কৃতির পরিবেশ বৃদ্ধির মাধ্যম দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়।

যদিও সংস্কৃতির শারীরবৃত্তীয় পরিবেশ তার ভৌত এবং রাসায়নিক পরিবেশের মতো পরিষ্কার নয়, সিরাম উপাদানগুলির একটি ভাল বোঝা, বিস্তারের জন্য প্রয়োজনীয় বৃদ্ধির কারণগুলির সনাক্তকরণ এবং সংস্কৃতির কোষগুলির মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট সম্পর্কে আরও ভাল বোঝার।(অর্থাৎ কোষ-কোষের মিথস্ক্রিয়া, গ্যাসের প্রসারণ, ম্যাট্রিক্সের সাথে মিথস্ক্রিয়া) এখন নির্দিষ্ট সেল লাইনকে সিরাম-মুক্ত মিডিয়াতে সংষ্কৃত করার অনুমতি দেয়।

1. সংস্কৃতি পরিবেশ কোষের বৃদ্ধিকে প্রভাবিত করে
অনুগ্রহ করে মনে রাখবেন যে কোষের সংস্কৃতির অবস্থা প্রতিটি কোষের জন্য আলাদা।
অস্বাভাবিক ফেনোটাইপের প্রকাশ থেকে কোষ সংস্কৃতির সম্পূর্ণ ব্যর্থতা পর্যন্ত একটি নির্দিষ্ট কোষের প্রকারের জন্য প্রয়োজনীয় সংস্কৃতির অবস্থা থেকে বিচ্যুত হওয়ার পরিণতি।অতএব, আমরা সুপারিশ করি যে আপনি যে সেল লাইনে আগ্রহী তার সাথে পরিচিত হন এবং আপনার পরীক্ষায় ব্যবহার করা প্রতিটি পণ্যের জন্য প্রদত্ত নির্দেশাবলী কঠোরভাবে অনুসরণ করুন।

2. আপনার কোষের জন্য একটি অপ্টিমাইজড সেল সংস্কৃতি পরিবেশ তৈরি করার জন্য সতর্কতা:
সংস্কৃতি মিডিয়া এবং সিরাম (আরও তথ্যের জন্য নীচে দেখুন)
pH এবং CO2 স্তর (আরও তথ্যের জন্য নীচে দেখুন)
প্লাস্টিক চাষ করুন (আরও তথ্যের জন্য নীচে দেখুন)
তাপমাত্রা (আরও তথ্যের জন্য নীচে দেখুন)

2.1 সাংস্কৃতিক মিডিয়া এবং সেরাম
সংস্কৃতির মাধ্যম হল সংস্কৃতির পরিবেশের সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ অংশ, কারণ এটি কোষের বৃদ্ধির জন্য প্রয়োজনীয় পুষ্টি, বৃদ্ধির কারণ এবং হরমোন সরবরাহ করে এবং সংস্কৃতির pH এবং অসমোটিক চাপ নিয়ন্ত্রণ করে।

যদিও প্রাথমিক কোষ সংস্কৃতি পরীক্ষাগুলি টিস্যু নির্যাস এবং শরীরের তরল থেকে প্রাপ্ত প্রাকৃতিক মিডিয়া ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল, তবে প্রমিতকরণের প্রয়োজনীয়তা, মিডিয়ার গুণমান এবং বর্ধিত চাহিদা নিশ্চিত মিডিয়ার বিকাশের দিকে পরিচালিত করে।তিনটি মৌলিক ধরনের মিডিয়া হল বেসাল মিডিয়া, হ্রাসকৃত সিরাম মিডিয়া এবং সিরাম-মুক্ত মিডিয়া, এবং তাদের সিরাম পরিপূরকের জন্য বিভিন্ন প্রয়োজনীয়তা রয়েছে।

2.1.1 মৌলিক মাধ্যম
Gibco সেল সংস্কৃতির মাধ্যম
বেশিরভাগ সেল লাইন অ্যামিনো অ্যাসিড, ভিটামিন, অজৈব লবণ এবং কার্বন উত্স (যেমন গ্লুকোজ) ধারণকারী মৌলিক মিডিয়াতে ভালভাবে বৃদ্ধি পায়, তবে এই মৌলিক মিডিয়া ফর্মুলেশনগুলি অবশ্যই সিরামের সাথে সম্পূরক হতে হবে।

2.1.2 হ্রাসকৃত সিরাম মাধ্যম
জিবকো লো সিরাম মিডিয়াম সহ বোতল
কোষ সংস্কৃতি পরীক্ষায় সিরামের প্রতিকূল প্রভাব কমানোর আরেকটি কৌশল হল সিরাম-হ্রাস করা মিডিয়া ব্যবহার করা।হ্রাসকৃত সিরাম মাধ্যম হল একটি মৌলিক মাধ্যম সূত্র যা পুষ্টি এবং প্রাণী থেকে প্রাপ্ত উপাদানে সমৃদ্ধ, যা প্রয়োজনীয় সিরামের পরিমাণ কমাতে পারে।

2.1.3 সিরাম-মুক্ত মাধ্যম
জিবকো সিরাম-মুক্ত মাধ্যম সহ বোতল
সিরাম-মুক্ত মাধ্যম (SFM) উপযুক্ত পুষ্টি এবং হরমোন ফর্মুলেশন দিয়ে সিরাম প্রতিস্থাপন করে পশুর সিরামের ব্যবহারকে বাধা দেয়।অনেক প্রাথমিক সংস্কৃতি এবং কোষের লাইনে সিরাম-মুক্ত মাঝারি ফর্মুলেশন রয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে চাইনিজ হ্যামস্টার ওভারি (CHO) রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন উৎপাদন লাইন, বিভিন্ন হাইব্রিডোমা সেল লাইন, ইনসেক্ট লাইন Sf9 এবং Sf21 (Spodoptera frugiperda), পাশাপাশি ভাইরাস উৎপাদনের জন্য হোস্টের জন্য (উদাহরণস্বরূপ, 293, VERO, MDCK, MDBK), ইত্যাদি। একটি সিরাম-মুক্ত মাধ্যম ব্যবহার করার প্রধান সুবিধাগুলির মধ্যে একটি হল বৃদ্ধির কারণগুলির একটি উপযুক্ত সংমিশ্রণ নির্বাচন করে নির্দিষ্ট কোষের ধরণের জন্য মাধ্যমটিকে নির্বাচনী করার ক্ষমতা।নিম্নলিখিত টেবিলে সিরাম-মুক্ত মিডিয়ার সুবিধা এবং অসুবিধাগুলি তালিকাভুক্ত করা হয়েছে।

সুবিধা
স্বচ্ছতা বাড়ান
আরও ধারাবাহিক পারফরম্যান্স
সহজ পরিশোধন এবং ডাউনস্ট্রিম প্রক্রিয়াকরণ
সঠিকভাবে সেল ফাংশন মূল্যায়ন
উৎপাদনশীলতা বৃদ্ধি
শারীরবৃত্তীয় প্রতিক্রিয়াগুলির আরও ভাল নিয়ন্ত্রণ
উন্নত সেল মিডিয়া সনাক্তকরণ
অসুবিধা
সেল টাইপ নির্দিষ্ট মাধ্যম সূত্রের প্রয়োজনীয়তা
উচ্চ বিকারক বিশুদ্ধতা প্রয়োজন
বৃদ্ধিতে মন্থরতা

2.2.1 pH স্তর
বেশিরভাগ সাধারণ স্তন্যপায়ী কোষের রেখা পিএইচ 7.4 এ ভালভাবে বৃদ্ধি পায় এবং বিভিন্ন কোষ রেখার মধ্যে পার্থক্য ছোট।যাইহোক, কিছু রূপান্তরিত কোষ রেখা সামান্য অম্লীয় পরিবেশে (pH 7.0 – 7.4) ভালভাবে বৃদ্ধি পেতে দেখা গেছে, যখন কিছু সাধারণ ফাইব্রোব্লাস্ট সেল লাইন সামান্য ক্ষারীয় পরিবেশ পছন্দ করে (pH 7.4 – 7.7)।Sf9 এবং Sf21-এর মতো পোকামাকড়ের কোষের রেখাগুলি pH 6.2-এ সবচেয়ে ভাল বৃদ্ধি পায়।

2.2.2 CO2 স্তর
বৃদ্ধির মাধ্যমটি সংস্কৃতির pH নিয়ন্ত্রণ করে এবং pH-এর পরিবর্তনকে প্রতিরোধ করার জন্য সংস্কৃতির কোষগুলিকে বাফার করে।সাধারণত, এই বাফারিং জৈব (উদাহরণস্বরূপ, HEPES) বা CO2-বাইকার্বোনেট-ভিত্তিক বাফার ধারণ করে অর্জন করা হয়।যেহেতু মাধ্যমের pH দ্রবীভূত কার্বন ডাই অক্সাইড (CO2) এবং বাইকার্বোনেট (HCO3-) এর সূক্ষ্ম ভারসাম্যের উপর নির্ভর করে, তাই বায়ুমণ্ডলীয় CO2-এর পরিবর্তন মাধ্যমের pH পরিবর্তন করবে।অতএব, CO2-বাইকার্বোনেট-ভিত্তিক বাফারের সাথে একটি মাঝারি বাফার ব্যবহার করার সময়, বহিরাগত CO2 ব্যবহার করা প্রয়োজন, বিশেষ করে যখন খোলা সংস্কৃতির খাবারে কোষগুলিকে সংস্কৃতি করা হয় বা উচ্চ ঘনত্বে রূপান্তরিত কোষের লাইনগুলিকে সংস্কৃতি করা হয়।যদিও বেশিরভাগ গবেষকরা সাধারণত বাতাসে 5-7% CO2 ব্যবহার করেন, বেশিরভাগ কোষ সংস্কৃতি পরীক্ষা সাধারণত 4-10% CO2 ব্যবহার করে।যাইহোক, সঠিক pH এবং অসমোটিক চাপ অর্জনের জন্য প্রতিটি মাধ্যমের একটি প্রস্তাবিত CO2 টান এবং বাইকার্বনেট ঘনত্ব রয়েছে;আরও তথ্যের জন্য, মাঝারি প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী পড়ুন।

2.3 প্লাস্টিক চাষ
সেল কালচার প্লাস্টিক বিভিন্ন আকার, আকার এবং পৃষ্ঠের বিভিন্ন সেল কালচার অ্যাপ্লিকেশনের জন্য উপলব্ধ।আপনার সেল কালচার অ্যাপ্লিকেশনের জন্য সঠিক প্লাস্টিক বেছে নিতে সাহায্য করার জন্য নিচের সেল কালচার প্লাস্টিক সারফেস গাইড এবং সেল কালচার কন্টেইনার গাইড ব্যবহার করুন।
সমস্ত থার্মো সায়েন্টিফিক ননক সেল কালচার প্লাস্টিক দেখুন (বিজ্ঞাপন লিঙ্ক)

2.4 তাপমাত্রা
কোষ সংস্কৃতির জন্য সর্বোত্তম তাপমাত্রা অনেকাংশে হোস্টের শরীরের তাপমাত্রার উপর নির্ভর করে যেখান থেকে কোষগুলি বিচ্ছিন্ন হয় এবং তাপমাত্রার শারীরবৃত্তীয় পরিবর্তনের উপর একটি কম পরিমাণে (উদাহরণস্বরূপ, ত্বকের তাপমাত্রা কঙ্কালের পেশীর চেয়ে কম হতে পারে। )কোষ সংস্কৃতির জন্য, অতিরিক্ত উত্তাপের চেয়ে অতিরিক্ত গরম হওয়া একটি গুরুতর সমস্যা।অতএব, ইনকিউবেটরের তাপমাত্রা সাধারণত সর্বোত্তম তাপমাত্রার সামান্য নিচে সেট করা হয়।

2.4.1 বিভিন্ন সেল লাইনের জন্য সর্বোত্তম তাপমাত্রা
সর্বাধিক মানব এবং স্তন্যপায়ী কোষ লাইন সর্বোত্তম বৃদ্ধির জন্য 36°C থেকে 37°C-তে রাখা হয়।
সর্বোত্তম বৃদ্ধির জন্য পোকামাকড়ের কোষ 27°C তাপমাত্রায় চাষ করা হয়;নিম্ন তাপমাত্রায় এবং 27°C এবং 30°C এর মধ্যে এরা ধীরে ধীরে বৃদ্ধি পায়।30 ডিগ্রি সেলসিয়াসের উপরে, পোকামাকড়ের কোষগুলির জীবনীশক্তি হ্রাস পায়, এমনকি যদি এটি 27 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ফিরে আসে, কোষগুলি পুনরুদ্ধার করবে না।
এভিয়ান সেল লাইনের সর্বোচ্চ বৃদ্ধি পেতে 38.5°C প্রয়োজন।যদিও এই কোষগুলিকে 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে রাখা যেতে পারে, তবে তারা আরও ধীরে ধীরে বৃদ্ধি পাবে।
ঠান্ডা রক্তের প্রাণী (যেমন উভচর, ঠান্ডা জলের মাছ) থেকে প্রাপ্ত কোষ রেখা 15°C থেকে 26°C পর্যন্ত বিস্তৃত তাপমাত্রা সহ্য করতে পারে।